Dans des conditions optimales, la formation de complexes antigènes-anticorps se produit quand les sites antigéniques et les molécules d’anticorps sont approximativement en quantité égale. C’est la zone d’équivalence. Si les anticorps sont en excès, le complexe a du mal à se faire, pouvant rendre la réaction négative, car il y a compétition entre les anticorps pour occuper les sites antigéniques disponibles. La saturation des sites empêche la visualisation du complexe antigène-anticorps. C’est le phénomène de prozone.
À l’inverse, si le nombre de sites antigéniques est très élevé et la concentration d’anticorps faible, une molécule d’anticorps peut s’unir à l’antigène sans cependant faire le pont avec le même antigène sur une autre hématie. La réaction antigènes-anticorps peut ne pas être visible. C’est le phénomène de postzone.
Il est donc important de respecter la concentration optimale des hématies au cours des analyses et les directives du fabricant pour éviter de fausses réactions négatives. Ce phénomène peut être neutralisé soit en diluant le sérum possédant un excès d'anticorps et ainsi rétablir l'équilibre, soit en diluant les globules rouges et ainsi éviter l'excès d'antigènes lors de la réaction.
